1、胃蛋白酶或蛋白酶K溶液(即用型) | 6ml |
2、杂交液(即用型) | 6ml |
3、杂交冲洗液(即用型) | 6ml |
4、封闭液(即用型) | 6ml |
5、抗生物素蛋白链菌素-过氧化物酶(即用型) | 6ml |
6、DAB 3 组分(20×) | 每种组分1ml |
1、脱蜡和脱水 二甲苯 二甲苯 100%酒精 100%酒精 空气干燥或37℃烘干 | 5分钟 5分钟 3分钟 3分钟 5分钟 |
2、胃蛋白酶溶液(即用型)1-2滴覆盖切片(不同的组织和探针可需要不同的孵育时间),37℃孵育10分钟或室温孵育20分钟 | |
3、用蒸馏水或0.1M TBS充分冲洗 | |
4、脱水 80%酒精 95%酒精 100%酒精 空气干燥或37℃烘干 | 1分钟 1分钟 1分钟 5分钟 |
5、生物素标记的DNA探针混和液(即用型)1-2滴覆盖玻片,95℃孵育10分钟; | |
6、37℃湿盒中杂交,4小时至过夜; | |
7、TBS或PBS冲洗至洗脱盖玻片; | |
8、杂交冲洗液(即用型)1-2滴覆盖玻片,37℃孵育10分钟; | |
9、清洁剂冲洗 | 2分钟×2 |
10、3%过氧化氢的甲醇溶液 | 10分钟 |
11、清洁剂冲洗 | 2分钟×3 |
12、封闭液(即用型) | 10分钟 |
13、清洁剂冲洗 | 2分钟×3 |
14、抗生物素蛋白链菌素-辣根过氧化物酶(即用型) | 30分钟 |
15、清洁剂冲洗 | 2分钟×3 |
16、DAB | 10-20分钟 |
17、苏木素复染 | 1-5分钟 |
18.蒸馏水充分冲洗 | |
19.脱水并除去二甲苯,封片。 |