| 1.胃蛋白酶或蛋白酶K溶液(即用型) 2.杂交液(即用型) 3.杂交冲洗液(即用型) 4.封闭液(即用型) 5.鼠抗地高辛(即用型) 6.辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG聚合物(即用型) 7.DAB 3 组分(20×) | 6ml 6ml 6ml 6ml 6ml 6ml 每种组分1ml |
| 1.脱蜡和脱水 二甲苯 二甲苯 100%酒精 100%酒精 空气干燥或37℃烘干 | 5分钟 5分钟 3分钟 3分钟 5分钟 |
| 2.胃蛋白酶溶液(即用型)1-2滴覆盖切片(不同的组织和探针可能需要不同的孵育时间) | 37℃孵育10分钟或室温孵育20分钟 |
| 3.用蒸馏水或0.1M TBS充分冲洗 | |
| 4.脱水 80%酒精 95%酒精 100%酒精 空气干燥或37℃烘干 | 1分钟 1分钟 1分钟 5分钟 |
| 5.地高辛标记的DNA探针混和液(即用型)1-2滴覆盖玻片 | 95℃孵育10分钟 |
| 6.37℃湿盒中杂交，4小时至过夜； | |
| 7.TBS或PBS冲洗至洗脱盖玻片; | |
| 8.杂交冲洗液(即用型)1-2滴覆盖玻片，37℃孵育10分钟； | |
| 9.清洁剂冲洗 | 2分钟×2 |
| 10.3%过氧化氢的甲醇溶液 | 10分钟 |
| 11.清洁剂冲洗 | 2分钟×3 |
| 12.封闭液(即用型) | 10分钟 |
| 13.清洁剂冲洗 | 2分钟×3 |
| 14.鼠抗地高辛(即用型) | 30分钟 |
| 15.清洁剂冲洗 | 2分钟×3 |
| 16.辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG聚合物(即用型) | 30分钟 |
| 17. DAB | 10-20分钟 |
| 18.苏木素复染 | 1-5分钟 |
| 19.蒸馏水充分冲洗 | |
| 20. 脱水并除去二甲苯，封片。 |
