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IHC技术攻略——去除切片中的“水珠”

发布时间:2021-5-20 10:45:04



前言:


合格的切片是病理诊断的前提,往往切片制作出来并没有那么完美,比如因脱水不足或封片剂过干封片不佳产生“水珠”一样的间隙或者点状结晶、黑核的现象,很是影响阅片,也很影响心情,怎么办?小窍门来了。



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日常工作中发现制作完成的切片出现水珠,或者镜下观察有类似色素样的点状缩晶和黑色光滑细胞核样结晶。而且往往这种情况会成批出现,如果重新制片又会造成时间和试剂的浪费,如何补救?以下内容可借鉴参考。

 

切片出现水珠或点状结晶的原因

  1. 透明剂与脱水剂互溶不佳;

  2. 脱水剂失效或脱水剂更换不及时,造成脱水不足;

  3. 天气原因造成切片受潮;

  4. 长时间未封片或封片剂过干未能完全覆盖组织产生“水珠”的间隙;


切片的修复

  • 问题切片脱胶:去除盖玻片(盖玻片已经粘住,可加热待树胶融化后去除),浸泡二甲苯中至切片上的胶完全脱掉后从二甲苯中取出;

  • 切片水化:将脱胶完全的切片依次浸入无水乙醇2缸,95%乙醇2缸,85%的乙醇1缸中进行乙醇梯度水化。免疫组化染色切片每缸2min;HE染色片每缸5s;

  • 切片再次脱水透明:切片经85%乙醇1缸,95%乙醇2缸,无水乙醇2缸梯度脱水;免疫组化染色切片每缸2min;HE染色片每缸5s;二甲苯中透明2min;

  • 切片再次封片观察:透明后的切片直接用封片剂封固后镜下观察。

 

如果明确得知是封片不佳造成的结晶与黑核,另有快速处理方式为加热切片后直接使用二甲苯浸泡,去掉盖玻片,再次重新封片。

特别提醒:以上方法适用中性树胶封固的切片,不同实验室日常操作步骤略有差别,需根据实际情况调整验证后采用!

参考文献:

[1]武振汝,陈梦琳,李丽,等. 一种用于去除病理切片中水珠的方法[J]. 临床与实验病理学杂志,2021,37(2):236-237. DOI:10.13315/j.cnki.cjcep.2021.02.028.

[2]顾利萍,俞吉霞. 探讨常规制片中空气结晶及处理方法[J]. 临床与实验病理学杂志,2020,36(3):366-367. DOI:10.13315/j.cnki.cjcep.2020.03.032.

 (02):236-237.[doi:10.13315/j.cnki.cjcep.2021.02.028]