制片不是技术活,但是而制出大量优质的切片并非易事,在常规病理制片的过程中,经常会遇到各种原因引起的组织脱水、透明、浸蜡不足、组织切片染色灰白、组织结构不清等问题,导致染色失败,而胃镜活检标本、穿刺等小活检组织标本,由于组织小,一旦出现上述问题,大多都无法补取材,及时查明失败原因,积极补救是第一要事。
处理措施:溶掉石蜡,二甲苯脱蜡2h——二甲苯2h——无水乙醇1h——80%乙醇1h后转入70%甲醛乙醇固定液重新固定,时间根据组织大小确定。手工处理措施:溶掉石蜡,保持组织内的石蜡成分处于溶融状态;同时在75℃水浴槽内先后放入装有丙酮的AB 两组烧杯,时间差约5min;加热丙酮,当A杯丙酮沸腾时放入组织块,可以看到丙酮中逐渐有白色糊状石蜡沉淀出现,组织块有液泡冒出;当B杯丙酮沸腾时,迅速将组织块从A换入B杯中,处理10分钟,此时丙酮中石蜡沉淀减少,组织块无或少量液泡冒出;取出组织块投入75℃石蜡溶液中直至组织块无气泡冒出约15min;后续进行常规包埋程序。注意:实际操作中根据组织块体积大小或数量调整AB丙酮处理时间。上机处理措施(莱卡):溶掉石蜡后组织放入脱水盒中,将装有组织的脱水盒有序放置在需清洗的脱水篮中,利用脱水机内标准清洗程序清洗组织。程序为:二甲苯60℃20 min,二甲苯60℃5 min,无水乙醇5 min;程序完成后放入95%乙醇中脱水、脱脂、固定30 min左右,再依次放入85%乙醇中20 min,70%乙醇中20 min;最后将处理后的组织与当日取材的新鲜标本一起进入常规固定、脱水、透明、浸蜡程序。
处理措施:蜡块粗修后放在冰水中浸泡或用5mmol/L 盐酸水浸泡或者用氨水等软化剂软化,再缓慢仔细地切片,切片时刻度比平时薄一些效果可能会更好。处理措施1:将蜡块重新切片,将组织片贴片于防脱载玻片上,65℃ 烤片 30 min,常规脱蜡至水化,将切片放入不锈钢锅中水浴加热煮 30 min,再进行常规HE染色。处理措施2:切片,烤片40 min(延长烤片的时间)。常规脱蜡到水,蒸馏水洗后滴加酸苏木素,放入60℃烤箱中染色3 min,水洗,返蓝,水洗,镜下观察,因为是酸苏木素,视染色情况而定可以不分化。流水冲洗15 min,酸化沉淀伊红1min,上行脱水,透明,封片。特别提醒:不同实验室日常操作步骤略有差别,需根据实际情况调整验证后采用!参考文献:
[1] 徐建勤,程国平 . 含蜡组织脱水不足的补救 [J]. 临床与试验病理学杂志,2010 ,26(3):378.
[2]沈贵华,黄建,项征,等. 固定脱水不佳组织样本改良处理的优选方式[J]. 诊断病理学杂志,2020,27(10):759,761.
[3]傅春燕,冯德云,杨晓静,等. 浅谈HE制片中组织固定脱水不佳的补救措施[J]. 中国现代医学杂志,2005,15(15):2379-2380.
[4]肖飞盈,许林杰 . 组织蜡块处理过程中出现的问题及解决方法[J].医药前沿,2015,5(27):12-13.
[5]简明病理学技术,丁伟,王德田主编.