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IHC技术攻略——简说二抗

发布时间：2021-10-21 19:52:26

前言：

说到免疫组化，众所周知主要分为一抗和二抗，一抗即能和抗原特异性结合的抗体，而二抗是针对一抗的抗体，能和一抗结合，也可称为抗体的抗体，主要用于检测抗体的存在。二抗的信号放大有多种方法，生物素与非生物素，直接法还有间接法，到底有何不同？本期小编就和大家简单来说说。

免疫组化检测放大系统通常称为二抗，主要是被用于链接一抗并进行酶促化学反应的一种桥接过程。通常是一种由抗一抗的免疫球蛋白和可以引起底物化学反应的酶组合而成。

免疫组织化学相当长一段时期内的发展很大程度上反应在二抗检测系统的发展。发展的趋势表现为灵敏度的持续增加和干扰因素的不断减少。从非标记抗体法到标记抗体法，生物素检测系统到非生物素检测系统。由于非标记抗体酶法存在一定的缺陷，如敏感性不足，临床已经很少使用，目前临床常用二抗为抗体标记法，又可分为生物素型和非生物型两种类型。

生物素型的检测放大系统原理是利用生物素和链酶亲和素具有高度亲和力的生物学特性。在二抗上预先标有生物素，在酶上标有链酶亲和素，形成抗原～一抗～生物素化二抗～酶标记的链霉亲和素复合物。由于酶在遇到相应底物催化反应而呈色，达到对组织中目标抗原的检测和放大作用。不同的公司采用不同的商业名称如SABC、LABC、SP等。

随着抗原热修复的广泛应用，人们也发现在许多组织中存有内源性生物素，它可以和酶上的链霉亲和素结合，导致染色反应，于是诞生了非生物素型检测放大系统。非生物素型检测放大系统的原理是利用线状的葡聚糖或多聚糖大分子等作为载体和酶结合，再将葡聚糖-酶复合物连接到第二抗体上，形成多聚体，分子量较大，可以结合更多的一抗和酶，能够显著放大抗原信号。以这种链接方式替代生物素和链霉亲和素链接，这样就可以避开因为内源性生物素导致的染色反应，因此特异性更好。

图1. 二抗的分类

表1：生物素系统与非生物素系统对比

其他方法简介

EPOS法：采用葡聚糖为骨架，将特异性抗体和辣根过氧化物酶结合在一起，形成 HRP-多聚化合物-特异性抗体巨大复合物，该复合物内不含第二抗体及亲和素。染色时，只需在组织切片上加入EPOS试剂即可完成，勿需再加酶标记第二抗体，也被成为直接法。

催化放大系统（CSA）：也称酪胺信号放大（tyramine signal amplification system，TSA）或CARD（catalyzed repoter deposition）。通过酪胺的过氧化物酶反应（即HRP在H₂O₂存在下催化酪胺盐，形成共价键结合位点），产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基（包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基）结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的生物素沉积，与随后加入的酶标记链霉亲和素结合，如经几次这样的循环放大，可以网络许许多多的酶分子，其敏感性得到几何级放大。

小结

如果要问小编如何选择二抗？小编认为在实际工作中不必要太在意二抗的原理，应该关注特异性、敏感性、放大效应及性价比。当然小编不建议使用生物素型检测系统，原因是操作时间较长，需要进行内源性生物素封闭，但经常会出现阻断不完全的情况，就算阻断完全则需要更长的时间，所以推荐非生物素型检测系统。

有人说非生物素也有多种类型，如何选择？小编认为选择合适的二抗时尽量参考科室以往的经验，初次选择可以从以下几个方面考虑：

1.对时间的要求，如果需要快速出结果选择非生物素型一步法，如迈新MaxVision1/2/3；

2.敏感性，如在用的一抗的稀释度偏低或样本抗原含量低时建议采用高灵敏度的二抗系统；

3.染色液类型，如DAB和AEC显色剂适用于辣根过氧化物酶型系统；

4.自动化仪器，目前市面常见的免疫组化染色仪器通常采用的是封闭式二抗系统，二抗系统厂家已固定。

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IHC技术攻略——简说二抗

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